Equipamentos multiusuários “Fluorescência em Sistemas de Interesse Biofísico”
1. Fluorescência estática e com resolução temporal.
O estudo de sistemas biológicos pela análise da radiação absorvida ou emitida é uma poderosa ferramenta tanto para compreensão de processos básicos nos organismos vivos, como para a utilização da luz em diagnóstico e na terapia médica.
Muitos dos experimentos envolvem medidas de posição espectral e intensidade da emissão fluorescente, obtidas com espectrofluorímetros estáticos ou de estado estacionário, que permitem também observações da despolarização da emissão quando a excitação e a detecção são feitas com o auxílio de polarizadores. Informações relevantes são obtidas com o uso de técnicas que permitem a resolução temporal da emissão: o tempo característico envolvido nos processos de absorção e emissão fluorescente, da ordem de 10-9 s é compatível com eventos relacionados à interação da molécula emissora com o meio circundante. Desse modo, as técnicas de fluorescência estática combinadas com as técnicas resolvidas no tempo são particularmente atraentes para o estudo de diversos fenômenos relacionados às propriedades dinâmicas de sistemas biológicos.
O laboratório dispõe de instrumento para medidas de fluorescência estática e resolvida no tempo. Neste segundo caso ultiliza-se a técnica de “single photon time correlation” em que pulsos de excitação são gerados por laser pulsado de largura típica de 5 picosegundos. O equipamento, com componentes Spectra Physics e Edimburg Instruments, permite obter decaimento de intensidade de fluorescência com resolução de dezenas de picosegundos.
2. Espectroscopia de Correlação de Fluorescência e Microscopia por Tempo de Vida de Fluorescência”
O Laboratório de Fotobiofísica do Departamento de Física da FFCLRP USP possui também o equipamento multi-usuário FCS/FLIM (Fluorescence Correlation Spectroscopy / Fluorescence Lifetime Imaging). O instrumento “PicoQuant MT 200” foi adquirido no programa “Equipamentos multi-usuários” da FAPESP e está disponível no Laboratório de Fotobiofísica do Departamento de Física da FFCLRP USP.
A Espectroscopia de Correlação de Fluorescência (FCS) é uma técnica que combina espectroscopia de fluorescência com microscopia em óptica confocal. Permite a análise de moléculas fluorescentes em concentrações extremamente baixas, com alta resolução espacial. O sistema de varredura define regiões de interesse na amostra nas quais podem ser realizadas medidas de tempo de vida dos compostos fluorescentes e os dados podem ser processados de modo a se obter imagens no processo conhecido como FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy). A técnica é utilizada em Biofísica e Bioquímica em experimentos para medidas de coeficientes de difusão, constantes cinéticas, agregação molecular, polidispersão e massas moleculares, estudos sobre interações anticorpo-antígeno, receptor-ligantes, interações com ácidos nucléicos, interações entre proteínas, atividade enzimática, processos de enovelamento de proteínas, além de experimentos em moléculas únicas e motores moleculares.
3. Utilização
Os equipamentos estão sob a responsabilidade geral do Prof. Amando Siuiti Ito e sua operação técnica está a cargo do técnico Adriano Batista da Costa a quem os interessados devem se dirigir para ter acesso a sua utilização. É necessário informar as fontes dos recursos financeiros que serão utilizados para cobrir as despesas de utilização dos equipamentos.
Contato
Laboratório de Fotobiofísica
Departamento de Física
FFCLRP-USP
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